제1선택 용리액 및 용리액 조제방법의 예

1. 제1선택 용리액

보다 더 효과적인 광학이성체의 분리를 하기위한 용리액은 화합물의 종류에 따라 틀리지만,
일반적으로 아래와 같은 용리액을 제1선택으로 추천합니다.

CHIRALCEL AD-RH
(1) 중성산화물 : 물/acetonitrile = 60/40 (v/v)
(2) 산성화합물 : 인산수용액 (pH2.0) /acetonitrile = 60/40 (v/v) 또는 0.2M인산-인산2수소칼륨완충액 (pH2.0) / acetonitrile = 60/40 (v/v)
(3) 염기성 화합물 : 20mM인산완충액 (pH8.0) / acetonitrile = 60/40 (v/v)
(4) 양성(兩性)화합물 : 0.1M 핵사플로오로인산칼륨(또는 나트륨)수용액 (pH2.0 with 인산) / acetonitrile = 60/40 (v/v)

CHIRALCEL OJ-RH
(1) 중성산화물 : 물/acetonitrile = 70/30 (v/v)
(2) 산성화합물 : 0.2M인산-인산2수소칼륨완충액 (pH2.0) / acetonitrile = 70/30 (v/v)
(3) 염기성 화합물 : 0.1M핵사플로오로인산칼륨(또는 나트륨)수용액 / acetonitrile = 70/30 (v/v)
(4) 양성(兩性)화합물 : 0.1M 핵사플로오로인산칼륨(또는 나트륨)수용액 (pH2.0 with 인산) / acetonitrile = 70/30 (v/v)

CHIRALCEL OD-RH
(1) 중성산화물 : 물/acetonitrile = 60/40 (v/v) 또는 0.2M인산2수소칼륨수용액 / acetonitrile = 60/40 (v/v)
(2) 산성화합물 : 0.2M인산-인산2수소칼륨완충액 (pH2.0) / acetonitrile = 60/40 (v/v)
(3) 염기성 화합물 : 0.1M핵사플로오로인산칼륨(또는 나트륨)수용액 / acetonitrile = 60/40 (v/v)
(4) 양성(兩性)화합물 : 0.1M 핵사플로오로인산칼륨(또는 나트륨)수용액 (pH2.0 with 인산) / acetonitrile = 60/40 (v/v)

이동상 : 수용액 / acetonitrile = 60/40 (v/v)
유속 : 0.5ml/min.
칼럼 온도 : 25도
검출 : UV (254nm)

그림 4-1 용리액 차이에 따른 중성, 산성 및 염기성화합물의 분리

-용리액에 의한 분리효과의 비교-
(칼럼 : CHIRALPAK AD-RH)
그림 4-1에서 보는바와같이 다음과 같은 것을 알 수 가있습니다.
(1) 중성화합물 : AD-RH, OJ-RH, OD-RH를 토대로 어디 쪽 용리액도 차이가 관찰이 안됩니다.
표준적으로 [물/ acetonitrile계]를 사용하십시오.
(2) 산성화합물 : AD-RH, OJ-RH, OD-RH를 토대로 인산수용액 또는 인산완충액을 사용하는 경우
좋은 분리값을 얻을 수 있습니다. 표준적으로 [인산수용액 (pH2.0) /acetonitrile계]를 사용하십시오.
(3) 염기성 화합물 : AD-RH는 붕산완충액 또는 인산완충액을 이용할 경우 좋은 분리 값을 얻을 수 있습니다.
표준적으로 [20mM인산완충액 (pH 8.0) / acetonitrile = 60/40 (v/v)]를 사용하십시오.
단, OJ-RH 똔 OD-RH는 핵사플로오로인산칼륨(또는 나트륨)수용액 / acetonitrile계를 사용하면 좋은 분리 값을 얻을 수 있습니다.

CHIRALEL OJ-RH CHIRALCEL OJ-RH
CHIRALCEL OJ-RH CHIRAL OD-RH

그림 4-2 염기성 화합물의 분리예

2. 용리액 조제 방법의 예

염기성화합물을 분리할 때 사용하는 20mM인산완충액 (pH8.0) / acetonitrile = 60/40 (v/v) 및 산성화합물을
분석할 때 사용되는 20mM인산완충액 (pH2.0) / acetonitrile = 60/40 (v/v) 를 예로 조제방법을 설명하겠습니다.

20mM인산완충액(pH2.0) / acetonitrile = 60/40 (v/v)의 조제방법

(1) 20mM인산2수소칼륨수용액 및 20mM의 인산수소2나트륨수용액을 각각 조제하겠습니다.
여기에서 사용되는 물은 증류수 또는 이온교환수를 사용하십시오.
(2) 방금 (1)에서 조제한 인산2수소칼륨수용액에 pH메타로 pH값을 모니터 하면서 안산수소2나트륨수용액을 첨가하고 pH값을 8.0으로 조정합니다.
인산2수소칼륨수용액 : 인산수소2나트륨수용액 = 2:1 로 약 pH8.0이 됩니다.
(3) 그리고 (2) 의 수용액과 HPLC용 acetonitrile과의 체적비율을 60/40으로 충분하게 혼합하고 0.45마이크로미터의 멘브레인 필터로 여과, 탈기(脫氣)합니다.
기체를 빼는 작업은 HPLC장치에 대가사의 접속을 권장합니다.
초음파 감압탈기의 경우는 용리액의 조성이 변하지 않게 탈기 시간을 일정하게 하십시오.
그리고 용리액은 사용할 때마다 반드시 재 제조합시다.

20mM인산완충액 (pH2.0) / acetonitrile = 60/40 (v/v)의 조제방법

(1) 20mM인산2수소칼륨수용액을 조제합니다. 사용되는 물은 증류수 또는 이온교환수를 사용하십시오.
(2) (1)에서 조제한 인산2수소칼륨수용액에 pH메타로 pH값을 모니터하면서 인산(약85wt%)를 첨가해서 pH값을 2.0으로 조정합니다.
(3) (2)의 수용액과 HPLC용 acetonitrile과의 체적비율을 60/40으로 충분하게 혼합하고 0.45마이크로미터의 멘브레인 필터로 여과, 탈기(脫氣)합니다.
기체를 빼는 작업은 HPLC장치에 대가사의 접속을 권장합니다.
초음파 감압탈기의 경우는 용리액의 조성이 변하지 않게 탈기 시간을 일정하게 하십시오.
그리고 용리액은 사용할 때마다 반드시 재 제조합시다.