다당유도체계 칼럼의 분리조건 설정에 대한 주의사항
분리조건 설정시의 주의점으로서 칼럼의 이력(메모리 효과), 이동상에 있는 수분의 영향, 측정온도의 영향에 대해서 설명하겠습니다.
매모리효과
먼저 메모리 효과에 대해서 설명하겠습니다.
ChiralCEL OJ의 신품 칼럼에서 나프틸에틸아민 같은 염기성화합물도 무첨가계로 분리하는 경우가 있습니다.
그러나 이 칼럼에 트리플로오로 초산계의 이동상을 통액하면 무첨가계의 이동상으로 되돌려도 무첨가계의 이동상으로는 나프틸에틸아민은 분리가 안됩니다.
이처럼 통액한 이동상의 영향이 남는 현상을 메모리 효과라고 합니다.
단 이런 경우에도 디에틸아민을 첨가한 이동상계로는 문제없이 분리가 가능합니다.
메모리 효과에 의한 트러블을 피하기 위해서는 중성, 산성, 염기성의 이동상별로 전용 칼럼을 사용하시거나 보다 더 실용적인 대응은 반드시 샘플성상에 대응되는 첨가제를 이동상으로 첨가하는 것을 권장합니다.
이동상에 있는 수분의 영향
다음은 이동상에 있는 수분의 영향에 대해서 설명하겠습니다.
위의 그림은 순상조건하에서 트랜스-스틸벤옥사이드를 측정한 예입니다.
왼쪽 그래프는 횡축에 이동상에 있는 수분 함량을 종축에 분리계수(알파)를 취한 것이고 우측의 그래프는 전과 같이 횡축에 수분함량, 종축에 보호유지계수(k')를 취한 것입니다.
상기그림에서 명확하게 나타난 것처럼 수분함량이 많아지는 것에 따라 분리계수가 작아지는 것을 알 수 가있습니다.
이런 경우 제1피크의 용출시간에는 변화가 없지만 제2피크의 용출시간이 수분함량이 많아지는 것에 따라 빨라졌기 때문에 분리가 나쁘다는 것을 알 수 가있습니다.
이처럼 샘플에 따라 이동상중에 있는 수분함량에 의해 분리가 틀려지는 경우가 있으므로 용매중의 수분관리도 재현성이 좋은 분리조건설정에 중요한 경우가 있습니다.
측정 온도의 영향
다음은 측정온도의 영향에 대해서 설명하겠습니다.
위의 그림처럼 측정온도가 변화하는 것에 따라 용출시간과 분리계수가 변화하므로 재현성이 좋은 측정조건을 만들기 위해서도 측정온도관리도 중요합니다.
위의 예는 역상조건에서 측정했습니다만, 순상조건하에서도 같습니다.