다당유도체계 칼럼의 분리조건 설정법
1.칼럼의 선택
ChiralCEL OB-H, OC, OD-H, OF, OG, OJ-H 및 ChiralPAK AD-H, AS-H
2. 검토할 이동상
Hex/IPA = 90/10
Hex/IPA(EtOH) = 50/50
EtOH = 100
3. 첨가제
염기성 샘플 : 디에틸아민을 0.1% 첨가
산성 샘플 : 트리플로오로초산을 0.1% 첨가
4. 다음은 다당계 칼럼의 분리조건 설정법을 설명하겠습니다.
검토할 내용은
먼저, 각각의 칼럼중에서 주요분리제와 그 특성에서 설명한 경향등을 참고로 최적인 칼럼을 선택합니다.
그리고 이동상계의 설정을 합니다.
보호유지하기가 약한 화합물이라면 핵산이 맣이 포함된 용매를, 보호유지가 강한 화합물이라면 알코올이 많이 포함된 용매를 이동상으로 선택합니다.
그리고 샘플이 염기성이라면 디에틸아민을 첨가하고 산성이라면 트리플로오로초산의 첨가가 중요합니다.
이동상조성이 분리에 미치는 효과
측정
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1) 이동상에 디에틸아민을 첨가하지 않는경우
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2) 이동상에 디에틸아민을 첨가한경우
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상기그림은 이동상 조성, 특히 첨가제가 분리에 미치는 효과를 나타낸것입니다.
이처럼 염기성인 화합물일경우 이동상에 디에틸아민을 첨가하지않으면 피크가 넓어지는 경우가 많고 디에틸아민을 첨가하면 그림처럼 피크가 샤프한 경우가 많으므로 염기성물질의 경우 디에틸아민을 첨가함으로서 분리에 보다 더 효과적입니다.
역으로 산성화합물의 경우 이동상에 트리플로오로초산을 첨가함으로서 분리에 보다더 효과적입니다.
보다좋은 분리를 하기위해서
보다 좋은 분리를 하기위한 검토 플로어는 상기와같습니다.
먼저, 화합물의 성상에 적합한 제 1선택 용매를 선택합니다.
즉 중성화합물에는 무첨가계의 이동상을, 염기성화합물에는 디에틸아민을 첨가한 이동상을,
산성화합물에는 트리플로오로초산 첨가계 이동상을 선택하십시오.
다음은 실제로 분석해보고 용출이 빠르지 않는가와 역으로 용출하지 않는경우 이동상의 용매비율에 문제가 있으므로 보호유지신간이 10~30분이 되도록 핵산과 알코올의 비율을 조정하십시오.
그렇게 해도 분리가 안되면 다른 다당계 칼럼이나 역상계 조건을 변경하십시오.
용출시간의 조정에 의해 어느정도 분리가 된다면 다음은 알코올의 종류나 비율, 첨가성분, 유속, 주입량등을 조정함으로서 조건으 최적화를 합니다.
분리조건의 탐색예(1-1 ; 칼럼의 선택)
측정조건
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실제의 예를 들어 설명하겠습니다.
위의 그림처럼 랙탐(lactam)유도체를 일정조건으로 각종 다당계 칼럼으로 분석했습니다.
그 결과, ChiralCEL OD, ChiralCEL OB, ChiralPAK AD, ChiralCEL OG로 분리했습니다만, 어느것도 충분하게 분리됐다고 볼 수는 없습니다.
그리고 ChiralPAK AS로는 용출이 안되고 ChiralCEL OF로 용출된 피크의 면적값에서 이성체만 검출된것을 알 수 있었습니다.
이처럼 용출하기 어려운 경우 조금전에 말한것처럼 용매으 비율을 변경하고 알코올의 농도를 올려 용출시간을 짧게 합니다.
분리조건 탐색예(1-2 ; 용매비율의 변경)
측정조건
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용매의 알코올 비율을 올림으로서 ChiralPAK AS, ChiralCEL OF 칼럼 모두 이성체가 용출 되었습니다.
그리고 샘플은 ChiralPAK AS로 가장 좋은 분리가 되었으므로 칼럼은 ChiraPAK AS를 선택하는 것이 좋다고 판단됩니다.